赤芍总苷逆转黑色素瘤细胞株多药耐药的效果及机制研究.pdf

Gi Chinese General Practice
Sjanar: 2012, Vol, I5. No.C
用药分析
赤芍总苷逆转黑色素瘤细胞株多药耐药的效果及机制研究
王亚珍,吕品田,王风红,王辰英
摘要】目的探讨赤芍总苷(TPC)对人黑色素A375细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方
法采用不同剂量TPG(2mg/L、50mg/L和100mg/T)处理体外培养的黑色素瘤A375细胞,3-(4,5-二甲基噻
唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录一聚合酶链反应法(RT-PCR)
检测细胞多药耐药基因1(MDRL)、生存素( Survivin)、拓扑异构酶Ⅱ同工酶(TOP2a)、多药耐药相关蛋白(MRPI)
RNA的表达情况;蛋白质印迹( Western blot)法检测细胞MDR1、 Survivin、TOP2a、MRPI1蛋白表达水平。结果
TPG对人黑色素瘤细胞有明显的抑制作用;TPG组较対照组细胞MDR1、 Survivin、TOP2a、 MRPI MRNA及蛋白表达水
平降低,羞异均有统计学意义(P<0.01)。结论TPG可抑制黑色素蜜细胞生长,通过调节多药耐药因子的表达逆转
MDR。
【关键词』黑色素瘤;抗药性,多药;反转录聚合酶链反应
【中图分类号】R739.5【文献标识码】A【文章编号】1007-9572(2012)01-0328-03
.eversion of Multidrug Resistance in Human Malignant Melanoma Cell Line by Total Paeony lucosides WANG Ya
chen, L Pin -tian, WANG Feng-hong, et al. Department of Oncology, Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Chi
Abstract Objective To investigate the reversal effect and mechanism of total paeonyglucosides(TPG) on multi
drug resistance(MDR in human malignant melanoma A375 cells. Methods Human malignant melanoma A375 cells were trea-
ted y TPG of different oses(25 m / 0 m/L, 100 m/ inhibi on aes were measured by MTT assay in vitro. The ex-
pressions of MRNA of MDRI, Survivin, TOP2 and MRPI were determined by reverse transcription-polymerase chain reaction
(RT-PCR ) and the expressions of protein were determined by Western blot in human malignant melanoma cells. Results TPG
could significantly inhibi he ow h of human malignant melanoma cells Compared with the control group, the expressions of
MDRI, Survivin, TOP2& and MRP] were significantly decreased in the TPG group(P<.05).Conclusion TPC can inhibit
the growth of human malignant melanoma cells, and can reverse MDR of human malignant melanoma by regulating the expression
of multidrug resistance associated factors
Key words] Melanoma; Drug resistance, multiple; Reverse transcriptase polymerase chain reaction
黑色素瘤病的中晚期或具有高危因素的早期病变应予以1.1材料
全身辅助化,但黑色素瘤细胞对化疗药物相对不敏感。多药1.1L.1细胞株人黑色素瘤A375细胞,购自中国科学院上
耐药(MDR)是指肿瘤细胞对结构和作用机制不同的多种抗海细胞研究所。
肿瘤药物产生交又耐药性,是肿瘤化疗失败的重要原因,逆转1.1.2药物TPG由河北医科大学药学院赠予,纯度>95%。
肿瘤的MDR表型、提高化疗效果已成为当前研究的热点。1.1.3主要试剂3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5
赤芍总苷(TPG)具有明显的抻制肿瘤作用?,但关于该药与苯基四氮唑溴盐(MT),购自 Sigma公司; Trizol Reagent,
肿瘤MDR表型之间关系的研究报道较少。本研究应用TPG作购自 Invitrogen公司;多药耐药基因1(MDR1)、生存素
用于人黑色素瘤细胞,探讨其调节肿瘤MDR的作用和分子机( Survivin)、拓扑异构酶Ⅱ同工酶(T0Pa)、多药耐药相关蛋
制
白(MRP1)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶( GAPDH)引物由上
材料与方法
海生工有限公司合成;MDR1、 Survivin、TOP2a、MRPI
GAPDH一抗及辣根过氧化物酶标记的二抗均为美国 Santa Cruz
公问产品。
作者单位:050051河北省石家庄市,河北省人民医院保健处(王
1.2方法
亚珍,王辰英),肿瘤科(吕品田),院办室(王凤红
1.2.1MT法检测细胞增殖活性人黑色素瘤A375细胞以
通讯作者:050051河北省石家庄市,河北省人民医院保健处;
E-mail:wyzhen-1972@sohu.com
含10%胎牛血清的RPMI1640常规培养,对数生长期的细胞
制成细胞悬液,分成4组,每组设6个复孔,(1)对照组,