尿液中甲苯二异氰酸酯及其代谢产物的高效液相色谱法测定.pdf

尿液中甲苯二异氰酸酯及其代谢产物的
高效液相色谱法測定
张志涛2刘带邵华
(1.山东省职业卫生与职业病防治研究院,山东济南250062
2.济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院,山东济南250062;
3.山东农业工程学院,山东济南250062
摘要:用高效液相色谱法直接測定尿液中的甲苯二胺和甲器,G1316A柱温箱,G1315D二极管阵列(DAD)检测器等;色谱柱:
苯二异顥酸酯,有效评价TDI在体内的代谢及残留。该方法操 ZORBAX SB-C18柱,4.6×150mm5pm。津勝抽真空过滤系统
作简便、快捷,无需特殊试剂和设备
试剂:pH为7.0的三乙胺磷酸缓神溶液、色谱纯乙腈、甲醇
关键词:高效液相色谱;甲苯二胺;甲苯二异氰酸酯;
2.6-TD标准物质(TCI公司);2,4-TDI标准物质( Fluka公司);2,
Abstract: Determination of T DA and T DI in urine by high4-TDA标准物质(东京T"RC公司);2,6-TDA(东京TRC公司)。
performance liquid chromatograph. This method is smple, rapid1.2实验条件
and need not Specid reagent and equi pment
流速:1.oOmI.min-
eyword: High performance liquid chromatography; TDA
进样量:5uL
TD
二极管阵列扫描,选择最优波长
甲苯二异氰酸酯( Toluene diisocyanate,TDI)应用非常广泛,
柱温箱:30℃
在高浓度T川环境中露,对接触粘膜有刺激性,可引起哮喘,1.3标准溶液制备
进而可致癌。有实验证明尿中TDA含量受环境中TDI暴露浓
(1)2.4-TDA标准储备液:精密称取0.0537g的2.4-TDA,用色
度高低的影响,二者存在着明显的剂量反应关系。TDI在体内谱甲醇溶解并定容至50mI,制得标准溶液浓度为1.074mg-mI.
的代谢产物为甲萃二胺( Diaminotoluene,TDA),可作为研究职
2)2.6-TDA标准储备液:精密称取0.0582g的2.6-TIDA,用
业接触TI尿中的生物标志物。用TDA作为生物标志物多用色谱甲醇溶解并定容至50mL.制得标准溶液浓度为1.164mg·mL
在检测车间空气中TDI的方法中,但也有人担心会有少量游
离TI未被降解直接排入尿中的可能,故本法使用高效液相色
(3)2.4-IDI标准储备液:精密称取0.0657g的2,4-TD,用色
谱法対尿液标本中的TDA及可能存在的TI进行测定。
谱甲醇溶解并定容至50mL.制得标准溶液浓度为1.314mg-mL
1材料与方法
(4)2,6-TDI标准储备液:精密称取0.0653g的2,6-TI,用
1.1仪器与试剂
色谱甲嵉溶解并定容至50mL,制得标准溶液浓度为1.306mg
仪器: Alien1260高效液相色谱仪,配有G1329B自动进样
0AD1G,Sg2404 Reloh(TDA201431201405281454380180201?
图1
91「化2015年3月
技术管理
(5)2,4-TD)A、2,6-TDA、2,4-TDl和2,6-TD1混标:分别量取
表2
上述四种标准液5.00mL,置于同一容量瓶中,用色谱甲醇稀释
标准级」2,4-TD)A浓度』2,6-TDA浓度2,4-TD浓度2,6-1D浓度
并定容于50ml,制得混标浓度分別为:107.1ug:-mI.、116.4ug
g-mL)「(g?mL)「(g-mL)「(pg?mL-)
2.628
mI.、131.4pg-mI.和1306ug·ml
2.612
4.284
4.656
5.256
1.4标准系列的制备
6.426
6.984
7.884
7.836
按照WST68-1996《研制生物样品监测检验方法指南》要
10.71
求准备好收集的尿液,经0.22m滤膜过滤,于1000omin'离
相关系数R
0.995
0.996
后备用
回归方程y=11.101x-「y=14.378x+「y=26.9S3-y=11.455
6.663
11.821
5.377
谁确吸取取混合标准溶液0θ,1,2.35mL.用处理好的尿液稀
检出限
0.7
0.5
0.3
0.7
释并定容至50mL.制成标准系列浓度见表1
甲苯二胺和甲苯二异氰酸在2-10ug/mL的范围里均有
表1
良好的线性关系
标准级/2,4-TDA浓度2,6-TDA浓度2,4-TDI浓度2,6-TDJ浓度
2.4精密度取标准曲线的3种浓度测定。由表3结果可知,
(gLっ)」(gnL」(ロmu(pguう」4种成分3种浓度的相对标准偏差(RSD)在1.1%-49%(要求控
2.328
2.628
2.612
制在5%以内)
4.284
4.656
5.256
224
表3
6.426
6.984
7.884
2,4-IDA浓度「2,6-1DA浓度』2,4-1D1浓度2,6-1D浓度
10.71
11.64
13.14
13.06
(pg?mL)「(pg?mL")「(pgmL)「(pg?mL)
1.5测定
精密度1
4.9
1.1
采集的尿液样品于10000mimr离心后,用三乙胺缓冲液
精密度2
3.7
3.2
和乙腈做流动相,根据TDA和TDI的化学性质优化HPC流动
精密度3
1,5
相梯度条件对离心后的尿样进行测定
2结果与讨论
2.5回收率测定在对已知含量的样品中加入3种浓度的标
2.1対同一基体中的四种成分定性,根摒保留时间用单组谁溶液,进行回收试验,其平均回收率为96.19%-102.3%(价表回
份标淮溶液确定混合标准液的色谱峰,根据出峰顺序,分别为收率要求95-105%)
2.6-TDA,2,4-TDA,2,6-TDI,2.4-TDI。见图1
3结语
2.2运用3D光谱图(见图2)发现从190mm400m的DAD
在实验室配备高效液相色谱仪常规仪器及配件的前提下,
的响应值逐渐减弱,在234m时,灵敏度最佳,但由于干扰峰也本方法通过简单的前处理过程,能对TDA和TD的进行定性及
相应增多,故选择更为理想的240mm波长作为检测波长。见图2定量检测,由于两种物质的同分异构体能够完全分离,故可以
达到同时对四种不同结构同时检测的效果。
参考文献
II] Pernilla Tind et al. Toxicokinetics of 2,4-and 6-toluene
diamine inhydrolysed urine and plasma after occupational exposure
to 2. 4-and 2, 6-toluene diisocyanate