SN_T 5706-2023 化妆品微生物检验方法 大肠埃希氏菌检验.pdf

学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载I C S7 1.1 0 0.7 0C C SY4 2中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 7 0 62 0 2 3化妆品微生物检验方法大肠埃希氏菌检验C o s m e t i c sm i c r o b i o l o g yD e t e c t i o no fe s c h e r i c h i ac o l i2 0 2 3-1 2-2 9发布2 0 2 4-0 7-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载前 言 本文件按照G B/T1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国深圳海关、中华人民共和国厦门海关、中华人民共和国烟台海关。本文件主要起草人:凌莉、涂晓波、彭小莉、黄成栋、董洁、袁慕云、冼钰茵、刘婧文、陈碧玲、廖荣军、陈梦琪、席静、段效辉。S N/T5 7 0 62 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载化妆品微生物检验方法大肠埃希氏菌检验1 范围本文件描述了化妆品中大肠埃希氏菌的定性检验方法。本文件适用于化妆品中大肠埃希氏菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。S N/T5 0 7 5 化妆品微生物检验制样规范3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要本方法利用大肠埃希氏菌具有-葡萄糖醛酸苷酶的活性,能分解5-溴-4-氯-3-吲哚-D-葡萄糖醛酸苷,在胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷琼脂平板上形成蓝绿色菌落,对其进行定性检验。注:本方法不适用于少部分-葡萄糖醛酸苷酶阴性的大肠埃希氏菌,如O 1 5 7。5 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。5.1 恒温培养箱:3 61。5.2 恒温装置:4 82。5.3 冰箱:28。5.4 均质器或乳液分散机(转速10 0 0r/m i n以上)。5.5 电子天平:感量0.1g。5.6 无菌锥形瓶:2 5 0m L或3 0 0m L。5.7 无菌吸管:1 0m L(具0.1m L刻度)。5.8 无菌培养皿:直径9 0mm。5.9 无菌均质袋或均质杯。5.1 0 无菌接种环:1 0L(直径约3mm)。5.1 1 p H计或精密p H试纸。5.1 2 质控菌株:大肠埃希氏菌AT C C2 5 9 2 2或C GMC C1.2 3 8 5或等效菌株作为阳性对照;弗氏柠檬酸1S N/T5 7 0 62 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载杆菌AT C C4 3 8 6 4或C I C C1 0 2 9 6或等效菌株作为阴性对照。6 培养基和试剂6.1 大豆酪蛋白卵磷脂吐温8 0(S C D L P)液体培养基:按A.1。6.2 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(T r y p t o n eB i l eX-g l u c u r o n i d e,T B X)琼脂:按A.2。7 检验程序7.1 化妆品中大肠埃希氏菌检验程序化妆品中大肠埃希氏菌的检验程序见图1。图1 化妆品中大肠埃希氏菌检验程序7.2 样品前处理和稀释待测的样品应在室温下保存,不要温育、冷藏和冷冻样品。样品的制样处理按S N/T5 0 7 5的规定执行。7.3 增菌培养吸取11 0稀释的样品匀液1 0m L接种到9 0m LS C D L P增菌液中,置于3 61培养箱培养1 8h2 4h。7.4 分离培养用无菌接种环挑取一环增菌培养液,划线接种于T B X平板培养基,倒置于3 61培养箱培养1 8h2 4h。在T B X平板培养基上出现蓝绿色菌落者,判断为大肠埃希氏菌阳性。8 结果报告T B X平板培养基上有蓝绿色菌落,报告每克(毫升)样品中检出大肠埃希氏菌。否则,报告每克(毫升)样品中未检出大肠埃希氏菌。2S N/T5 7 0 62 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载附 录 A(规范性)主要培养基和试剂A.1 大豆酪蛋白卵磷脂吐温8 0(S C D L P)液体培养基A.1.1 成分酪蛋白胨 1 7.0g大豆蛋白胨3.0g氯化钠5.0g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖2.5g卵磷脂1.0g吐温8 07.0g蒸馏水10 0 0m LA.1.2 制法先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其他成分混合,加热溶解,每瓶9 0m L,于1 2 1高压灭菌1 5m i n。注意振荡,使沉淀于底层的吐温8 0充分混合,冷却至2 5 左右使用。灭菌后的培养基在2 5时的p H为7.20.2。A.2 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(T B X)琼脂A.2.1 成分胰蛋白胨2 0.0g3号胆盐1.5g5-溴-4-氯-3-吲哚-D-葡萄糖醛酸苷(B C I G)7 5.0m g琼脂8.0g 1 8.0g蒸馏水10 0 0m LA.2.2 制法在2.5m L9 5%的乙醇中加入0.5m L1m o l/L的氢氧化钠溶液,然后加入B C I G的环己胺氢溴酸盐并混匀,与其他成分一并加入蒸馏水。或者将B C I G的钠盐,与其他成分一并加入蒸馏水。加热至完全溶解,必要时调节p H。1 2 1高压灭菌1 5m i n,灭菌后培养基在2 5时的p H为7.20.2。灭菌后的培养基可在冰箱28密封避光保存不超过1个月。S N/T5 7 0 62 0 2 3