DB43∕T 1522-2018 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定酶联免疫吸附法.pdf

饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定酶联免疫吸附法Determination of Deoxynivalenol in FeedEnzyme-linked Immunosorbent Assay湖南省地方标准DB43DB43/T 15222018 ICS 65.120B 46湖南省市场监督管理局发 布2018-12-25 发布2019-03-25 实施湖南省标准信息公共服务平台湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 15222018 I 目 次 前言 1 范围12 规范性引用文件13 原理14 试剂与材料15 仪器与设备26 采样27 试样和阳性添加试料的制备28 提取与测定29 结果计算210 结果判断211 灵敏度、准确度、精密度3 湖南省标准信息公共服务平台湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 15222018 II 前 言 本标准按 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 请注意本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南鑫广安农牧股份有限公司。 本标准主要起草人：李裕、肖安东、欧阳龙、陈立祥、宋跃君、袁旭鹏、陈罡、徐丽枚、黄勇、陈启友、谭美英、江小云、曹峰、刘芬、李艳平、周汝顺、雷加、周玉洁、江燕、邓钧红、魏唯。 湖南省标准信息公共服务平台湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 15222018 1 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的酶联免疫吸附测定方法的原理、 试剂与材料、 仪器与设备、采样、试样和阳性添加试料的制备、提取与测定、结果计算、结果判断、灵敏度、准确度、精密度。 本标准适用于我省植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 通过抗原抗体反应，特异性结合的酶标记物将底物转化为有色产物。酶标仪测定其吸光度，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。实验用水应符合 GB/T 6682 二级水的规定。 4.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对照品：含量98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 4.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对照溶液：取适量脱氧雪腐镰刀菌烯醇对照品，用水充分溶解后定容，使最终浓度为 20g/mL。置棕色瓶内 4避光保存，保存期不超过 15 d。 4.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫试剂盒 试剂盒由下列部分组成： a） 脱氧雪腐镰刀菌烯醇系列标准溶液。 b） 酶标板。 c） 酶标记物。 d） 脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体。 e） 底物溶液。 f） 显色溶液。 g） 终止液。 不同厂家试剂盒产品组成或名称可能不同。 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 15222018 25 仪器与设备 5.1 酶标仪。 5.2 天平：感量 0.01g 和感量 0.00001g。 5.3 离心机：转速5 000 r/min。 5.4 旋涡混合器。 5.5 微量移液器：20L，50L，100L，1 000L。 6 采样 按 GB/T 14699.1 的规定执行。 7 试样和阳性添加试料的制备 试样制备按 GB/T 20195 的规定执行。 阳性添加试料制备：称取适量空白试样，添加脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液，使其脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量为 200g/kg，作为阳性添加试料。 8 提取与测定 样品的提取与测定按试剂盒说明书执行。 9 结果计算 9.1 百分吸光度值以公式（1.1）表示： 0=%BB1.1100百分吸光度值 式中: B标准溶液或供试样品的平均吸光度值； B0零浓度标准溶液的平均吸光度值。 9.2 以标准溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度(ng/mL)的自然对数为 X 轴， 百分吸光度值为 Y 轴， 绘制标准曲线， 求出回归方程， 计算供试液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度。 饲料中的浓度按实际稀释倍数计算。 9.3 测定值为扣除阴性试样值后的平行样算术平均值。 10 结果判断 10.1 实验有效性判定 标准曲线应线性良好，且 R20.9900。 阴性试料的脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定值不能高于方法定量限。 阳性添加试料回收率应为（60.0130.0）%。 以上要求均符合时，实验判定为有效。 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 15222018 3 10.2 结果判定 供试试料检测结果低于定量限时，可判为未检出。当结果高于定量限时，建议用确证法确认。 11 灵敏度、准确度、精密度 11.1 灵敏度 本方法在饲料中的定量限为 100g/kg。 11.2 准确度 本方法在饲料中添加脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度为 100.0g/kg5 000.0g/kg 时， 回收率为 60.0%130.0%。 11.3 精密度 本方法的批内变异系数应15%，批间变异系数应20%。 湖南省标准信息公共服务平台