DB43∕T 1371-2017 瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程.pdf

瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程Regulation for Integrated Prevention and Control Technologyof the Cucurbit Vegetable Virus Diseases湖南省地方标准DB43DB43/T 13712017 湖南省质量技术监督局发 布2017-12-31 发布2018-03-31 实施ICS 65.020B 16湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 I 目 次 前言 1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 发生流行规律25 病害诊断26 防治原则27 防治方法28 加强病虫测报， 实行统防统治39 建立防治档案3附录 A （资料性附录） 瓜类蔬菜病毒病主要症状4附录 B （规范性附录） 病毒生物学检测和分子生物学检测5附录 C （规范性附录） 药剂防治瓜类蔬菜病毒病和传毒媒介昆虫一览表 10附录 D （资料性附录） 瓜类蔬菜病毒病防治档案 11 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省植物保护研究所提出。 本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：湖南省植物保护研究所、广东省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：刘勇、何自福、张松柏、张卓、史晓斌、张德咏、刘骏、郑立敏、佘小漫、汤亚飞、孙书娥。 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 1 瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程 1 范围 本标准规定了瓜类蔬菜病毒病的术语和定义、发生与流行规律、病害诊断、防治原则、防治方法、统防统治、防治档案等技术要求。 本标准适用于黄瓜、 西葫芦、 南瓜、 冬瓜等瓜类蔬菜上由小西葫芦黄花叶病毒 （Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）侵染引起的病毒病的综合防控。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB 8321 农药合理使用准则 GB 16715.1 瓜菜作物种子 第 1 部分：瓜类 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 综合防控技术 Integrated Prevention and Control Technology 综合防控是基于“预防为主、综合防治”的植保方针，以确保农业生产、农产品质量和农业生态环境安全为目标， 以减少农药使用为目的， 采取生态调控、 生物防治、 物理防治和科学用药等资源节约型、环境友好型技术来控制农作物病虫害的植物保护措施。 3.2 瓜类蔬菜 Cucurbit Vegetables 瓜类蔬菜主要包括黄瓜、西葫芦、南瓜、冬瓜等蔬菜。 3.3 病毒病 Virus Disease 由植物病毒侵染引起的病害，具有寄生性、专一性或广谱性等特征。 3.4 鉴别寄主 Differential Host 对特定病原物有特殊反应或表现特定症状的植物称为鉴别寄主。 3.5 阳性对照 Positive Control 凡是确定可以出现预期结果的处理，称为阳性对照。 3.6 阴性对照 Negative Control 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 2凡是确定不会出现预期结果的处理，称为阴性对照。 3.7 空白对照 Blank Control 凡是不加处理因素的处理，称为空白对照。 4 发生与流行规律 在湖南，瓜类蔬菜病毒病主要由小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）侵染引起。 瓜类蔬菜病毒病的发生与蚜虫的发生密切相关。一般地，田间蚜虫发生早、种群量大，病毒病发生严重，随着蚜虫种群不断增大和田间操作频繁，病毒病逐渐加重，并传播扩散。瓜类蔬菜病毒病也可以通过机械摩擦和种子带毒传播。田间整枝、打杈、搭架、施肥、除草、采果等农事活动，只要造成寄主微创口，即可导致病毒侵染与危害。越冬寄主植物、病残体及带毒种子均可成为病毒病的初侵染源；田间管理粗放、瓜类蔬菜长势弱，病毒病发生重；此外，土壤瘠薄、黏重、板结、排水不良和偏施氮肥都会加重病情发展。 5 病害诊断 5.1 病害田间诊断 瓜类蔬菜病毒病的危害症状主要有叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等症状，参见附录 A。 5.2 生物学检测与分子生物学检测 具体方法和检测结果见附录 B。 6 防治原则 以“预防为主，综合防治”为指导思想，根据瓜类蔬菜病毒病和传毒媒介昆虫的发生规律及危害特点，从保护生物多样性，优化生产环境，尽可能消灭和减少病毒来源，种植抗病优质品种，减少化学农药的使用角度开展综合防控，实现蔬菜生产安全、蔬菜生态环境安全和蔬菜产品质量安全。 7 防治方法 7.1 农业防治 7.1.1 选用抗病品种 选择符合 GB 16715.1 要求的抗病毒病品种。 7.1.2 合理轮作倒茬 合理轮作，实行 23 年以上轮作倒茬，有条件地区实行与水稻轮作，不要连续两年在同一块田种植瓜类蔬菜。 7.1.3 选种无毒种苗 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 3 在瓜类蔬菜种子播种前，用 5055的热水浸种 1015 min，随后用 30温开水浸泡种子（黄瓜25 h；西瓜 46 h；冬瓜 1315 min；南瓜 56 h；苦瓜 12 d；甜瓜 12 h） ，搓去种子表面粘液；再用 10%的磷酸三钠溶液浸种 20 min，捞出后用清水冲洗干净，然后催芽。严格选用无病虫健康的壮苗移栽到大田。 7.1.4 田园卫生 在定植前，结合整地，清除病残体，铲除田间及周边杂草。及时摘除病叶、病果或拔除病株，带出田外深埋或烧毁。 7.2 物理防治 7.2.1 防虫网防治传毒媒介昆虫 在瓜类蔬菜育苗或田间种植时，用 60 目以上的防虫网，可防止媒介昆虫本身对瓜类蔬菜作物的危害，同时防止其传播病毒病。 7.2.2 色板诱杀 利用蚜虫、粉虱、蓟马等成虫对黄色或蓝色有较强趋性的特性，在田间放置 3040 cm 的可降解的黄色粘虫板或蓝色粘虫板 300450 块/hm2， 呈棋盘式均匀插置田间， 粘虫板底部高出植株顶端 1020 cm，粘虫板粘满昆虫后及时更换。 7.2.3 银灰膜避虫 根据蚜虫对银灰色的趋避性，可采用银灰膜驱蚜。 7.3 生物防治 田间释放瓢虫、草蛉等捕食性天敌和丽蚜小蜂等寄生性天敌，防治蚜虫、粉虱、蓟马等传毒媒介昆虫。 7.4 药剂防治 在瓜类蔬菜定植后 13 d，将 25%噻虫嗪水分散粒剂稀释至 10001500 倍，按每株 50 ml 灌根处理，对传毒媒介蚜虫、粉虱、蓟马等进行预防。根据田间虫情，当田间有虫株率达到 5%（蚜虫）或 10%（粉虱、蓟马）时开始用药，选用高效、低毒、低残留、环境友好的药剂进行防治。农药使用应符合GB 4285 和 GB 8321 的相关规定。常用药剂及用法见附录 C。 8 加强病虫测报，实行统防统治 采用定点系统调查和普查相结合方法， 监测田间瓜类蔬菜病毒病及传毒媒介昆虫发生情况， 结合气象因素，进行预测预报。当病虫害达到影响经济阀值时，当地农业主管部门应组织种植户对整片瓜类蔬菜作物病毒病及其传播媒介昆虫开展统防统治。 9 建立防治档案 每次防治前，对田间瓜类蔬菜病毒病发生、前茬作物、防治等信息进行调查与登记，具体调查内容参见附录 D。 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 4 附录 A （资料性附录） 瓜类蔬菜病毒病主要症状 瓜类蔬菜病毒病症状主要为叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等，见图 A1。 花叶 黄化 泡状突起 皱缩 畸形 畸形 图 A1 瓜类蔬菜感染病毒病的主要症状 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 5 附录 B （规范性附录） 病毒生物学检测和分子生物学检测 一、病毒生物学检测 1病毒摩擦接种方法 将少许感染病毒的病叶放于消毒的研钵中，加入适量接种缓冲液，充分研磨；将金刚砂（400500目）均匀撒到待接种的叶片表面，左手食指和中指托住叶片，用无菌棉签蘸取少许研磨的病叶汁液，在待接种叶片上沿一个方向轻轻均匀地涂擦，一般从叶基到叶尖方向；用清水冲洗接过种的叶片，将植株放于网温室，在营养钵内插上标签，注明处理及接种时间。用缓冲液接种植株作为阴性对照。 2病毒分离与纯化 采用上述摩擦接种方法，将汁液中病毒接种于枯斑寄主上；待寄主表现单斑后，将单个枯斑切下，用接种缓冲液研磨，再接种枯斑寄主；第二次出现单斑后，再次切取单个枯斑，接种于枯斑寄主；第三次出现枯斑，切取单个枯斑，接种于系统寄主，出现系统症状，取叶片进行检测(图 B1、B3)。 3病毒的保存 取纯化后的发病叶片，采用冷冻干燥的方法处理，写明标签，置于-80冰箱中长期保存。 4寄主症状 将经分离纯化的病毒分离物分别接种到寄主植物敏感品种上，测定其致病力的强弱(图 B2、B4)。 a b 图 B1 ZYMV 分离物接种枯斑寄主和系统寄主的症状 a.苋色藜上枯斑；b.普通烟上系统花叶 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 6 a b 图 B2 ZYMV 分离物接种南瓜和西葫芦的症状 a.南瓜上泡状花叶；b.西葫芦上系统花叶 a b 图 B3 CMV 分离物接种枯斑寄主和系统寄主的症状 a.苋色藜上枯斑；b.普通烟上系统花叶 a b 图 B4 CMV 分离物接种黄瓜和西葫芦的症状 a.黄瓜花叶；b.西葫芦花叶 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 7 二、病毒分子生物学检测 1模板 RNA 的制备 用植物 RNA 提取试剂盒分别提取健康和感病瓜类蔬菜叶片组织的总 RNA。 2RT-PCR 扩增 2.1 反转录 以提取的总 RNA 为模板，随机引物进行反转录，合成 cDNA。具体反应体系及步骤如下： 1）配制反应混合液（表 B1） 表 B1 反应混合液 试剂试剂 体积体积 Total RNA 1 L Oligo dT Primer（50 M） 1 L dNTP Mixture (10 mM each) 1 L ddH2O 7 L 总体积 10 L 2）反应混合液孵育 将上述反应混合液 65孵育 5 min，冰上迅速冷却。 3）配制反转录反应液（表 B2） 表 B2 反转录反应液 试剂试剂 体积体积 反应混合液 10 L 5 PrimeScript II Buffer 4 L RNase Inhibitor (40 U/L) 0.5 L PrimeScript II RTase (200 U/L) 1 L ddH2O 4.5 L 总体积 20 L 4）反转录反应 将反转录反应液在 42处理 1 h 后，95处理 3 min 终止反应。反转录反应液保存于-20。 2.2 反应引物 1）ZYMV 的 RT-PCR 引物见表 B3。 表 B3 ZYMV 的特异性 RT-PCR 引物 病毒 名称 引物序列（53） 片段长度 CPF1： GTACAACACACGAGCGTCTC CPR： AGTGTGCCGTTCAGTGTCTTCG ZYMV CPF2： GATGGGAGTTGTAATGAATGG 511 bp 430 bp 2）CMV 的检测引物 湖南省标准信息公共服务平台DB43/T 13712017 8上游引物 CMV-F：5-ATGGACAAATCTGRATCWMCC-3； 下游引物 CMV-R：5-CTGGATGGACAACCCGTTC-3； 预期扩增大小为 773 bp。 2.3 反应体系 ZYMV 的 RT-PCR 反应体系见表 B4，CMV 的 RT